INTRACYTOPLASMIC INJECTION:
"INYECCIÓN INTRACITOPLÁSMICA"
También llamado ICSI es un tipo de Fecundación In Vitro que consiste en inyectar un sólo espermatozoide dentro de un óvulo.
CHARACTERISTICS:
Espermatozoides
El ICSI se usa principalmente en aquellos casos en los que hay un factor masculino de esterilidad, ya sea por:
- Una baja concentración de espermatozoides en el esperma (azoospermia, oligozoospermia,...)
- Problemas de movilidad en los espermatozoides
- El varón se ha sometido a una vasectomía o presenta una enfermedad infecciosa (VIH, hepatitis,...)
- Resulta imposible conseguir una eyaculación en condiciones normales.
El ICSI también está indicado en los casos de muestra de semen valiosas,como es el caso de muestras criopreservadas de varones vasectomizadas, o sometidos a radio o quimiterapia (en casos de varones jovenes que se deben someter a radioterapia o quimioterapia es recomendable congelar semen antes de someterse al tratamiento ya que este puede alterar su calidad espermática), estas muestras se llaman valiosas porque se dispone de una cantidad limitada de muestra, sin posibilidad de obtener más por lo que hay que optimizar su uso y evitar descongelar la muestra completa.
Otras indicaciones del ICSI incluyen el fracaso repetido a la hora de conseguir un embarazo tras varios ciclos de inseminación artificial o de fecundación in vitro, la mala calidad ovocitaria, la obtención de un bajo número de ovocitos tras la punción ovárica, o cuando es necesario identificar embriones genéticamente sanos en un caso de diagnóstico genético preimplantacional (la pareja tiene posibilidades de transmitir una alteración genética hereditaria y pretende evitarse con técnicas de diagnóstico genético).
- Una baja concentración de espermatozoides en el esperma (azoospermia, oligozoospermia,...)
- Problemas de movilidad en los espermatozoides
- El varón se ha sometido a una vasectomía o presenta una enfermedad infecciosa (VIH, hepatitis,...)
- Resulta imposible conseguir una eyaculación en condiciones normales.
El ICSI también está indicado en los casos de muestra de semen valiosas,como es el caso de muestras criopreservadas de varones vasectomizadas, o sometidos a radio o quimiterapia (en casos de varones jovenes que se deben someter a radioterapia o quimioterapia es recomendable congelar semen antes de someterse al tratamiento ya que este puede alterar su calidad espermática), estas muestras se llaman valiosas porque se dispone de una cantidad limitada de muestra, sin posibilidad de obtener más por lo que hay que optimizar su uso y evitar descongelar la muestra completa.
Otras indicaciones del ICSI incluyen el fracaso repetido a la hora de conseguir un embarazo tras varios ciclos de inseminación artificial o de fecundación in vitro, la mala calidad ovocitaria, la obtención de un bajo número de ovocitos tras la punción ovárica, o cuando es necesario identificar embriones genéticamente sanos en un caso de diagnóstico genético preimplantacional (la pareja tiene posibilidades de transmitir una alteración genética hereditaria y pretende evitarse con técnicas de diagnóstico genético).
PRELIMINARY:
Estimulación controlada del ovario:
La mujer recibe un tratamiento con gonadotropinas y análogos de GnRH o antagonistas de GnRH con el fin de estimular el crecimiento de más folículos y obtener más ovocitos con la punción ovárica. Podrá monitorizarse el crecimiento de los folículos en el ovario mediante ecografías transvaginales periódicas.
Punción ovárica:
Consiste en la punción del ovario con el objetivo de aspirar los ovocitos contenidos en los folículos. La punción es llevada a cabo mediante una aguja que se introduce por vía transvaginal utilizando la ecografía como guía visual.
Para evitar que la paciente sufra dolor alguno, ésta recibe anestesia local o sedación leve.
Para evitar que la paciente sufra dolor alguno, ésta recibe anestesia local o sedación leve.
Ecografía transvaginal
Recogida del semen y capacitación:
Tras la recogida de la muestra de semen, para el caso de muestras estándar, se realiza una capacitación del mismo con la realización de una dilución final de un millón de espermatozoides por mililitro con una movilidad progresiva superior al 33%. Para el caso de muestras patológicas se realizará una capacitación por minigradientes o lavado simple.
Preparación de los ovocitos:
Transcurridas entre 4 y 6 horas desde la punción ovárica, los ovocitos obtenidos se someten a un proceso de decumulación, que consiste en la eliminación de las células de la corona radiata y el cumulus oophorus que rodean el ovocito mediante una combinación de métodos enzimáticos y mecánicos. Es muy importante no proceder a la decumulación antes de que transcurra este tiempo tras la punción. Se va a realizar un incubado de un minuto en un medio tamponado con HEPES que contiene hialuronidasa, que es la enzima que normalmente poseen los espermatozoides para la degradación de la red de hialurónico que envuelve al ovocito y a las céulas del cúmulo que lo rodean, y se va a aspirar de forma repetida hasta eliminar completamente las células de la granulosa.
Desde un punto de vista más concreto, el proceso de decumulación se lleva a cabo incubando los ovocitos rodeados de células de granulosa en una solución tamponada con HEPES que contiene cierta cantidad de enzimas hialuronidasas (unos 80 UI/ml, por norma general). Los ovocitos se aspiran de manera constante utilizando durante el proceso pipetas de diámetro cada vez más de pequeño (de 300 a 150 micras), hasta que, finalmente, se lavan y se incuban de nuevo en un medio simple o en uno secuencial adaptado al desarrollo del embrión durante sus primeros estadios (hasta el día 3 después de la fecundación).
Desde un punto de vista más concreto, el proceso de decumulación se lleva a cabo incubando los ovocitos rodeados de células de granulosa en una solución tamponada con HEPES que contiene cierta cantidad de enzimas hialuronidasas (unos 80 UI/ml, por norma general). Los ovocitos se aspiran de manera constante utilizando durante el proceso pipetas de diámetro cada vez más de pequeño (de 300 a 150 micras), hasta que, finalmente, se lavan y se incuban de nuevo en un medio simple o en uno secuencial adaptado al desarrollo del embrión durante sus primeros estadios (hasta el día 3 después de la fecundación).
EQUIPMENT:
Consiste básicamente en un microscopio invertido con una placa calefactada para un mantenimiento óptimo del material biológico. Además también se necesitarán los manipuladores. Estos serán una pipeta de holding y una de inyección, además un manipulador eléctrico para grandes movimientos y uno hidráulico para movimientos más finos. También se van a necesitar microinyectores (como pipetas de inyección para aspirar e inyectar los espermatozoides). A su vez, también jeringas herméticas rellenas con aceite mineral y una mesa antivibratoria para asegurar las condiciones idóneas de trabajo.
PROCESS:
La placa en la que se realizará la ICSI estará cubierta de aceite mineral para mantener la osmolaridad y temperatura del medio (aunque la placa estará además colocada sobre una superficie calefactora del microscopio). En dicha placa se colocará una gota de PVP (polivinilpirrolidona) que ralentiza el movimiento de los espermatozoides y facilita la manipulación del espermatozoide seleccionado. También se colocan varias gotas de medio WASH tamponado con Hepes. En la gota de PVP se coloca 1 microlito de semen con una concentración de espermatozoides de 1 millón por mililitro. Los oocitos que se vayan a microinyectar se colocarán en las gotas de WASH (no más de 6 oocito por placa) donde no permanecerán más de 15 minutos.
Tras comprobar el correcto funcionamiento de la pipeta de inyección se seleccionan los espermatozoides según morfología y movilidad; el espermatozoide seleccionado se inmoviliza por presión mecánica de la cola. Con esto se consigue la activación por permeabilización de membranas ya que se liberan factores citosólicos que activan al oocito y facilitarán la posterior formación del pronúcleo masculino. Además, se impide el daño del movimiento en el interior del oocito. Tras la inmovilización, se aspira por la cola para asegurarnos de que al inyectarlo no se quede fuera la cabeza (no pasa nada si la cola se queda fuera)
El oocito se fija usando la pipeta holding, o de sujeción, situándo el corpúsculo lo más lejos posible de la zona de inyección para evitar daños en la placa meiótica y dejaremos el espermatozoide lo más cerca posible de las zonas activadas del oocito. Se coloca la pipeta de inyección con el el espermatozoide en la punta sobre el oocito y se presiona para atravesar la zona pelúcida y la membrana.
Si no se consigue romper la membrana ejerciendo presión con la pipeta de inyección, se puede intentar romper por aspiración o por stirring. La aspiración consiste en succionar con la pipeta haciendo entrar la membrana y parte del citoplasma en ella. Al romperse la membrana puede entrar un poco de citoplasma que se reintroduciría en la célula. El stirring consiste en volver a realizar otra punción, unas micras por debajo de la primera.
Una vez los óvulos han sido fecundados mediante la técnica de ICSI, éstos son cultivados en medios óptimos para facilitar la evolución del embrión y su división celular. Normalmente, tras dos o tres días de cultivo, se transfieren uno o varios de los embriones de mayor calidad al útero de la madre. Para ello se emplea un catéter muy fino que se introduce por vía vaginal hasta alcanzar el útero.
Esta técnica es indolora y no requiere ningún tipo de anestesia.
